整合组学数据分析乳腺癌细胞与外周免疫系统的交互作用北大核心CSCD

目的探讨乳腺癌上皮细胞与外周血之间的交互作用。方法从GEO数据库中获取乳腺癌上皮细胞及外周血单个核细胞(PBMCs)表达谱。GEO2R在线分析工具筛选差异表达基因,利用Uni Prot和STRING数据库对差异表达基因蛋白产物进行亚细胞定位,筛选乳腺癌细胞分泌蛋白及与其相互作用的PBMCs膜蛋白。Cytoscape软件构建互作网络。使用DAVID在线工具基因功能注释和KEGG通路富集方法对互作分子进行分析。结果共筛选到101对相互作用分子,基因功能主要涉及细胞黏附、细胞迁移、白细胞激活、免疫反应等生物学过程,参与的信号通路主要有细胞外基质—受体相互作用,细胞因子—细胞因子受体相互作用,趋化因子信号通路等。其中FN1、ITGBI、FLT1、COMP、CXCL12为关键蛋白。结论利用生物信息学方法,整合组学数据,能够有效获取信息,为乳腺癌的治疗及预后监测的研究开辟新思路。     

Dishevelled2在鼻咽癌顺铂耐药中的作用研究?

目的：探讨散乱蛋白2(Dishevelled2,DVL2)对鼻咽癌顺铂化疗敏感性的影响,为进一步研究 DVL2在肿瘤化疗耐药中的作用机制奠定前期基础。方法转染 pcDNA3.1-DVL2至鼻咽癌细胞5-8F,并用不同浓度(0,1,2,4,8,10,20μmol/L)的顺铂处理细胞,MTT 检测过转染 DVL2对5-8F 顺铂抑制率及半数抑制浓度(IC50)的影响,流式检测 DVL2高表达对顺铂的5-8F 细胞凋亡的影响,Western blotting 检测 DVL2对 Wnt/β-catenin 信号的影响。结果过表达 DVL2明显降低了顺铂对5-8F 的抑制率,提高了其 IC50,同时过表达 DVL2明显降低了顺铂诱导的5-8F 细胞的凋亡,进一步研究显示,过表达 DVL2明显增加了β-catenin 及其靶基因 P-gp 和 Survivin 的蛋白表达。结论过表达 DVL2可通过上调 Wnt/β-catenin 信号增强耐药相关蛋白 P-gp、Survivin 的表达,从而诱发鼻咽癌顺铂耐药。     

一种基于OmpA的分泌型原核表达载体的构建及应用

目的 构建大肠杆菌周质分泌型表达载体并验证其表达效果.方法 以pUC18-lpp为基础载体,构建含有核糖体结合元件(RBS)、信号肽(OmpA)、多克隆位点(MCS)的分泌型表达载体pUC-OmpA;通过分子克隆获得含有密码子优化的人生长激素(hGH)编码序列的pUC-OmpA-hGH,转化大肠杆菌JM109菌株并验证周质分泌性质.结果 经IPTG诱导后,SDS-PAGE、Western印迹分析结果显示周质空间有hGH重组表达产物,分子量约为22 kD,大小与预期一致,周质hGH约占菌体总hGH的43％.结论 成功构建了基于OmpA信号肽的周质分泌型表达系统,为实现生物活性蛋白的原核表达奠定了基础.     

葫芦素E抑制多发性骨髓瘤细胞增殖及与阿霉素的协同效应?

目的：研究葫芦素 E 对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响,并观察葫芦素 E 与阿霉素的协同效应。方法采用 CCK-8测定葫芦素 E 对4种多发性骨髓瘤细胞 MM1.S、MM1.R、U266和 RPMI8226的半数生长抑制率(GI50),并通过 CalcuSyn 协同效应分析软件,计算药物合用指数(CI),评价葫芦素 E 与阿霉素协同抗多发性骨髓瘤作用;流式细胞术检测葫芦素 E 对 MM1.S、MM1.R 的细胞周期、线粒体膜电位和细胞凋亡的影响;Western blot 检测凋亡相关蛋白 Caspase-3和 PARP 的变化,以及葫芦素 E 对 IL-10刺激的 RPMI8226细胞STAT3蛋白磷酸化的抑制作用。结果葫芦素 E 对4种多发性骨髓瘤细胞的 GI50均在(12.3~161.7)nM 范围内;葫芦素 E 导致多发性骨髓瘤细胞的 SubG1期细胞比例、凋亡细胞比例和线粒体膜电位下降细胞比例均明显增加,并出现凋亡相关的活化蛋白如 Cleaved Caspase-3和 Cleaved-PARP。葫芦素 E 能有效抑制 IL-10诱导的RPMI8226细胞 STAT3磷酸化,并能与阿霉素协同抗多发性骨髓瘤。结论葫芦素 E 通过抑制 STAT3蛋白磷酸化,诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡,并能协同阿霉素抗多发性骨髓瘤。     

以 T细胞为靶点的免疫抑制剂研究现状及进展

T细胞是在特异性免疫中发挥重要功能的免疫细胞,其正常的增殖分化在机体免疫监视、防御中起关键作用。大量研究［1‐2］表明,T细胞的异常增殖分化是器官移植排斥反应、自身免疫性疾病等众多疾病发生发展的关键影响因素。随着研究的不断深入,抑制T细胞活化和增殖的免疫抑制剂革命性地改变了这些疾病的临床治疗效果。因此,以 T 细胞为靶点的免疫抑制剂成为治疗器官移植排斥反应和控制自身免疫性疾病发病进程的重要临床治疗手段［3‐4］。本文综述了以T 细胞为靶点的治疗策略以及现有免疫抑制剂的应用和局限,同时总结了基于T细胞治疗的新靶点和天然产物来源的免疫抑制剂研究进展。     

大鼠骨髓来源内皮祖细胞的分离培养及鉴定

目的建立体外分离培养及鉴定大鼠骨髓来源内皮祖细胞（endothelialprogenitorcells,EPCs）的方法。方法采用密度梯度离心法从大鼠骨髓中分离得到骨髓单个核细胞,并结合差时贴壁法,收集24h后未贴壁细胞,然后用添加有多种细胞因子的内皮细胞基础培养基（endothelial basal medium,EBM-2）诱导培养获取EPCs。通过形态学观察、CD133和VEGFR-2抗体免疫荧光染色并结合FITC-UEA-1和Dil—ae—LDL的摄取功能来对EPCs进行鉴定分析,同时通过体外管样结构形成能力对EPCs进行功能性评价。结果在EBM-2培养基中诱导培养7d后,出现类似于血岛样的细胞集落,集落中央的细胞呈圆形,周边的细胞呈放射状;80％以上的细胞都是CD133＋／VEGFR＋2＋细胞,并且这些细胞同时能够摄取Dil-ac—LDL和结合FITC-UEA-1;EPCs在基质胶表面形成管腔样结构。结论密度梯度离心法结合差时贴壁法从骨髓中分离获得的单个核细胞,然后经EBM-2条件培养基诱导培养可获得较高纯度的EPCs。     

阻断p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞活性及c-myc蛋白表达的影响

目的：研究 p38MAPK对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞（HSC）活性及 c-myc蛋白表达的影响,探讨影响酒精性肝纤维化的相关机制。方法用不同浓度的p38特异性阻断剂SB203580干预乙醛刺激的大鼠HSC,显微镜下观察细胞形态变化,MTT法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,SABC法检测 c-myc蛋白表达。结果（1）乙醛刺激后的 HSC体积增大,增殖迅速,但随着加入 SB203580的药物浓度增大,细胞增殖变缓,体积变小,变形的细胞增多。（2）p38阻断剂 SB203580可抑制乙醛刺激的 HSC增殖,且高药物浓度组抑制效果更明显。（3）随着阻断剂浓度增高,G0及 G1期细胞增加,S期细胞逐渐减少,同时 c-myc蛋白表达阳性率减少。结论阻断 p38MAPK通路活性能抑制乙醛刺激的大鼠 HSC增殖,可能与下调 c-myc蛋白表达,阻止细胞由 G0/G1期进入 S期的DNA合成有关。     

FGF19调控肿瘤细胞增殖和自噬的生物学功能研究

目的 研究成纤维细胞因子19(FGF19)在调控肿瘤细胞增殖和自噬中的生物学功能.方法 采用不同浓度的FGF19重组蛋白处理肿瘤细胞,观察细胞的形态及生长情况.CCK-8检测经 FGF19重组蛋白处理后的细胞增殖情况.采用免疫印迹检测FGF19重组蛋白处理对肿瘤细胞内自噬体标志蛋白LC3以及自噬相关蛋白p62表达的影响.利用免疫荧光技术检测FGF19重组蛋白处理后细胞内自噬斑点的变化.结果 FGF19重组蛋白处理可以促进肿瘤细胞的增殖;免疫印迹结果显示,FGF19处理抑制肿瘤细胞内 LC3-II的表达;免疫荧光结果显示,经过FGF19重组蛋白处理后的肿瘤细胞内LC3斑点比对照组明显减少.结论 一定浓度的FGF19能促进肿瘤细胞的增殖,抑制其自噬.     

金黄色葡萄球菌肠毒素A在免疫应答中的作用

目的 获得重组表达、纯化金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),并研究其免疫增强作用.方法 利用基因工程法从金黄色葡萄球菌中克隆肠毒素A基因(sea),构建重组表达载体pET32a-sea,转化大肠杆菌(Rosetta)进行表达,并对其进行纯化;纯化后的SEA在白细胞介素2(IL-2)参与下,与半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)进行动物免疫实验,检测其免疫增强效果.结果 纯化后的SEA产量大约为40 mg/L菌液,SDS-PAGE分析在27 kD处有单一的目的条带;与对照组相比,SEA在IL-2的参与下与抗原共同免疫,抗体效价提高2.5倍.结论 SEA能够明显增强抗原的免疫应答效果.